Возбудитель фомоза рапса (Leptosphaeria maculans, Phoma lingam) поражает всходы и взрослые растения масличного рапса, вызывая некроз прикорневой части стебля с образованием сухих вдавленных пятен с черными пикнидами. Вредоносность проявляется в выпадах растений, снижении количественных и качественных показателей урожайности семян и уменьшение зеленой массы до 50% и более.

Специалисты Всероссийского центра карантина растений (ФГБУ «ВНИИКР» Россельхознадзора) оценили применимость метода ПЦР в режиме реального времени для выявления фомоза рапса в семенах.

В рамках исследования были подготовлены пять вариантов образцов, каждый из которых содержал по 400 семян рапса с различной степенью заражения. Из каждого варианта в шести повторностях выделяли ДНК, затем проводили модифицированную ПЦР в режиме реального времени с применением интеркалирующего красителя Eva Green.

Результаты исследования

При концентрации возбудителя в семенах рапса на уровне 4 ×10⁴ клеток гриба на миллилитр, модифицированный метод ПЦР в реальном времени позволил обнаружить возбудителя фомоза рапса со 100%-й точностью.

В серии вариантов с концентрацией патогена 4 ×10³ клеток гриба на миллилитр, положительные результаты были зафиксированы у 70% образцов.

Прохождение реакции внутреннего положительного контроля во всех тестируемых пробах подтверждает достоверность полученных результатов и отсутствие ингибирования реакций.

Практическое применение

Разработанные методы, включающие этапы подготовки образцов, выделения ДНК и проведения ПЦР с красителем, могут быть успешно применены для лабораторной диагностики L. maculans в семенах рапса, подлежащих фитосанитарному контролю.

Одним из значительных преимуществ данного подхода является высокая скорость получения результатов, что является критически важным для оперативного проведения фитосанитарных исследований.

Источник: Кузнецова А. А., Шухин Д. И., Дудченко И. П, Костин Н. К. Оценка применимости метода ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующим красителем для идентификации возбудителя Leptosphaeria maculans (Desm.) Ces. & De Not. в семенном материале рапса. Фитосанитария. Карантин растений. 2024;(2 SА (18B)): 32